期刊详情 INFORMATION
刊名：山西医科大学学报
主管：山西省教育厅
主办：山西医科大学
主编：郭政
周期：月刊
语种：中文
出版地：山西省太原市
开本：16开
ISSN：1007-6611
CN： 14-1216/R
邮发代号：22-11
复合影响因子：0.434
综合影响因子：0.316
被以下数据库收录
获奖情况：
中国科技类核心期刊
中国科技论文统计源期刊
美国CA源期刊
俄罗斯AJ刊源
山西省一级期刊
国外数据库收录：
CA 化学文摘(美)(2011)
期刊荣誉：
Caj-cd规范获奖期刊
人细胞角蛋白1基因的克隆、原核表达及纯化
作 者： <i> 王博 侯卫坤 周艳 蔡永松 王林玉 张英 韩燕 孟
关键词： 细胞角蛋白1 基因克隆 融合蛋白 原核表达系统
摘 要：目的 克隆人细胞角蛋白1（cytokeratin 1,CK1）,原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法 从人角质形成细胞系中提取RNA,以RT-PCR反转录c DNA,用特异性引物PCR扩增人CK1编码区全长基因（NM_006121 3）,内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切PCR产物和p ET-28a载体,T4 DNA连接酶将人CK1编码区全长基因克隆到p ET-28a载体上,IPTG诱导融合蛋白his-CK1的表达。融合蛋白经Ni2＋亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果 测序鉴定表明构建表达载体中人CK1序列正确;融合蛋白his-CK1的相对分子量为70 k D,并在大肠杆菌中高效表达;融合蛋白以包涵体形式,在变性条件下纯化融合蛋白his-CK1,其纯度大于90%;纯化的融合蛋白his-CK1可与商品化CK1抗体以及His抗体特异性结合。结论 成功构建了原核表达质粒p ET-28a-CK1,并成功诱导表达及纯化融合蛋白his-CK1。